PCR实验室的污染来源及应急方法

PCR实验室的污染来源

1、样本间交叉污染：

收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。

2、实验试剂污染：

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。 加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。

3、扩增产物污染：

大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是 PCR 反应中主要常见的污染问题。因为 PCR 产物拷贝量大，远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的 PCR 产物污染，就可形成假阳性。

4、克隆质粒污染：

作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

PCR实验室的污染应急处理方法

1、若核酸样本溢出：

立即用布或纸巾覆盖，由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂，约30分钟后，清除污染物品，再用次氯酸消毒剂擦拭，并用75%酒精喷洒，移动紫外车定点照射1小时。

2、其他不明情况污染：

1、暂停所有实验操作；2、清理实验室内所有物品，寻找污染来源；3、加大实验室的通风；4、对实验室内所有表面（台面、地面及墙面） 进行消毒；5、75%酒精空中喷雾；6、开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间（4小时以上）；7、以上措施每日进行，直至污染消除；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。PCR污染的范围很广，不同楼层也会产生影响，甚至会影响相邻建筑；PCR污染的时间很长，几个月甚至半年；PCR污染的影响很深，影响我们的生产计划，阻碍我们的研发进度，直接造成公司人力、财力的损失。但随着新技术和一些问题的明晰，无污染PCR检测的那一天离我们会越来越近！